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    植物RNA提取試劑盒的操作步驟
    瀏覽次數:122發布日期:2022-10-11

    植物RNA提取試劑盒的操作步驟

    背景

    植物RNA提取試劑盒用于從各種植物中提取純化高品質總RNA,也適用于真菌菌絲RNA的提取。獨-特的Shredder分離柱,用于勻質化和過濾高粘度的植物或真菌裂解物,同時采用硅基質膜吸附RNA進行純化,使多聚糖等各種污染物通過洗滌被有效去除,經洗脫的RNA可直接用于各種下游實驗。由本試劑盒提取RNA分子量大于200堿基,純度高,幾乎無DNA殘留。如果是對微量DNA非常敏感的RNA實驗,殘留的DNA可利用無RNase的DNase在柱上進行消化去除。提取的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot、RT-PCR和體外翻譯等實驗。


    植物RNA提取試劑盒

    操作步驟:

    1、50-100 mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末,加入600μl Buffer RL(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇)或Buffer RLC。渦旋振蕩使其充分裂解。

    2、將步驟1所得全部液體轉移至已裝入收集管的過濾柱中,12000rpm(~~13400×g)離心2分鐘,將收集管中的上清液轉移到一個新的離心管(自備)中。

    3、在步驟2所得干凈的裂解液中加入0.5倍體積的無水乙醇,迅速混勻。

    注意:加入乙醇后可能會產生沉淀,但不影響后續試驗。

    4、將上步得到的溶液轉移到已裝入收集管的吸附柱中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中,請分兩次轉入;12000rpm離心15秒,棄掉廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    6、配制DNase I混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混勻,配制成終體積為80μl的反應液。

    7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I混合液,20-30℃孵育15分鐘。

    8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm離心1分鐘,棄廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

    9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇),12000rpm離心15秒,棄廢液。

    10、重復步驟9。

    11、將吸附柱放回收集管中,12000rpm離心1分鐘,將吸附柱置于室溫數分鐘,以*晾干吸附柱中的無水乙醇。

    12、將吸附柱裝入新的離心管中,向吸附膜的中間加入30-50μl RNase-Free Water,室溫放置1分鐘,12000rpm離心1分鐘,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。


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